JOURNAL OF LIGHT INDUSTRY

CN 41-1437/TS  ISSN 2096-1553

食源性致病菌多重PCR检测技术建立及其应用

胡金强,丁慧敏,詹丽娟,赵卫东,侯莹莹,孙新城,高辉,耿尧

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胡金强, 丁慧敏, 詹丽娟, 等. 食源性致病菌多重PCR检测技术建立及其应用[J]. 轻工学报, 2022, 37(1): 12-19. doi: 10.12187/2022.01.002
引用本文:胡金强, 丁慧敏, 詹丽娟, 等. 食源性致病菌多重PCR检测技术建立及其应用[J]. 轻工学报, 2022, 37(1): 12-19.doi:10.12187/2022.01.002
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HU Jinqiang, DING Huimin, ZHAN Lijuan, et al. Development and application of multiplex PCR detection techniques for foodborne pathogenic bacteria[J]. Journal of Light Industry, 2022, 37(1): 12-19. doi: 10.12187/2022.01.002
Citation:HU Jinqiang, DING Huimin, ZHAN Lijuan, et al. Development and application of multiplex PCR detection techniques for foodborne pathogenic bacteria[J]. Journal of Light Industry, 2022, 37(1): 12-19.doi:10.12187/2022.01.002
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食源性致病菌多重PCR检测技术建立及其应用

  • 1. 18新利直播 食品与生物工程学院, 河南 郑州 450001;

  • 2. 河南省食品安全国际联合实验室, 河南 郑州 450001;

  • 3. 食品生产与安全河南省协同创新中心, 河南 郑州 450001;

  • 4. 河南农业大学 食品科学技术学院, 河南 郑州 450002

    • 作者简介:胡金强(1979-),男,河南省信阳市人,18新利直播 副教授,博士,主要研究方向为食品安全。E-mail:jqhu@zzuli.edu.cn;

  • 基金项目:国家自然科学基金项目（31201901）；河南省自然科学基金项目（182300410096）；河南省科技攻关项目（18210231069，182102110393）；星空众创空间创新培育孵化项目（2020ZCKJ103）

  • 中图分类号:TS201.6;TS207.4

Development and application of multiplex PCR detection techniques for foodborne pathogenic bacteria

  • 1. College of Food and Bioengineering, Zhengzhou University of Light Industry, Zhengzhou 450001, China;

  • 2. International Joint Laboratory of Food Safety of He'nan Province, Zhengzhou 450001, China;

  • 3. Collaborative Innovation Center of Food Production and Safety of He'nan Province, Zhengzhou 450001, China;

  • 4. College of Food Science and Technology, He'nan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China

  • Received Date:2021-05-07

    CLC number:TS201.6;TS207.4

  • 摘要:针对6种食源性致病菌特异性基因（金黄色葡萄球菌 nuc基因、副溶血性弧菌 tdh基因、单核细胞增生李斯特菌 hly基因、阪崎克罗诺杆菌 ompA基因、鼠伤寒沙门氏菌 invA基因和大肠杆菌O157：H7 rfbE基因）建立了多重PCR检测技术，分析了其特异性和敏感性，并评估了其在人工染菌牛奶中的应用可行性。结果表明：该检测技术可扩增预期的345 bp、307 bp、269 bp、237 bp、188 bp和142 bp细菌特异性PCR产物，无非特异性扩增，且不与非靶细菌产生交叉反应；对细菌纯培养物基因组DNA的检测限为10 pg，对人工染菌牛奶样品中致病菌的检测限为10 3CFU/mL，可实现6种食源性致病菌特异性强、灵敏度高、简便高效的同时检测。
    Abstract:Multiple PCR detection techniques were established for 6 foodborne pathogenic bacteria specific genes (the nucgene of Staphylococcus aureus, tdhgene of Vibrio parahaemolyticus, hlygene of Listeria monocytogenes, ompAgene of Cronobacter sakazakii, invAgene of Salmonella typhimurium, and rfbEgene of Escherichia coliO157:H7). The sensitivity and specificity of multiplex PCR were analyzed, and its application feasibility in artificially-contaminated milk was also evaluated. The results showed that the specific PCR products of 345 bp, 307 bp, 269 bp, 237 bp, 188 bp and 142 bp were amplified as expected in multiplex PCR without nonspecific amplification and cross reactivity with non-target pathogenic bacteria. Multiplex PCR developed in this study could detect as little as 10 pg of genomic DNA of pure bacterial culture and 10 3CFU/mL of milk artificially-contaminated with pathogenic bacteria, which could specifically, sensitively, rapidly and efficiently detect six foodborne pathogenic bacteria simultaneously.
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  • 收稿日期:2021-05-07
    通讯作者:陈斌, bchen63@163.com
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      沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

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    胡金强, 丁慧敏, 詹丽娟, 等. 食源性致病菌多重PCR检测技术建立及其应用[J]. 轻工学报, 2022, 37(1): 12-19. doi: 10.12187/2022.01.002
    引用本文:胡金强, 丁慧敏, 詹丽娟, 等. 食源性致病菌多重PCR检测技术建立及其应用[J]. 轻工学报, 2022, 37(1): 12-19.doi:10.12187/2022.01.002
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    HU Jinqiang, DING Huimin, ZHAN Lijuan, et al. Development and application of multiplex PCR detection techniques for foodborne pathogenic bacteria[J]. Journal of Light Industry, 2022, 37(1): 12-19. doi: 10.12187/2022.01.002
    Citation:HU Jinqiang, DING Huimin, ZHAN Lijuan, et al. Development and application of multiplex PCR detection techniques for foodborne pathogenic bacteria[J]. Journal of Light Industry, 2022, 37(1): 12-19.doi:10.12187/2022.01.002
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    食源性致病菌多重PCR检测技术建立及其应用

      作者简介:胡金强(1979-),男,河南省信阳市人,18新利直播 副教授,博士,主要研究方向为食品安全。E-mail:jqhu@zzuli.edu.cn
    • 1. 18新利直播 食品与生物工程学院, 河南 郑州 450001;
    • 2. 河南省食品安全国际联合实验室, 河南 郑州 450001;
    • 3. 食品生产与安全河南省协同创新中心, 河南 郑州 450001;
    • 4. 河南农业大学 食品科学技术学院, 河南 郑州 450002
    • 收稿日期: 2021-05-07
    基金项目:国家自然科学基金项目（31201901）；河南省自然科学基金项目（182300410096）；河南省科技攻关项目（18210231069，182102110393）；星空众创空间创新培育孵化项目（2020ZCKJ103）

    摘要:针对6种食源性致病菌特异性基因（金黄色葡萄球菌nuc基因、副溶血性弧菌tdh基因、单核细胞增生李斯特菌hly基因、阪崎克罗诺杆菌ompA基因、鼠伤寒沙门氏菌invA基因和大肠杆菌O157：H7rfbE基因）建立了多重PCR检测技术，分析了其特异性和敏感性，并评估了其在人工染菌牛奶中的应用可行性。结果表明：该检测技术可扩增预期的345 bp、307 bp、269 bp、237 bp、188 bp和142 bp细菌特异性PCR产物，无非特异性扩增，且不与非靶细菌产生交叉反应；对细菌纯培养物基因组DNA的检测限为10 pg，对人工染菌牛奶样品中致病菌的检测限为103CFU/mL，可实现6种食源性致病菌特异性强、灵敏度高、简便高效的同时检测。

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